电转感受态细胞BL21(DE3）

产品说明：
转化效率可达1×10¹⁰  cfu/μg pUC19以上

保存条件：
收到货后请立刻放入-80℃冰箱的下层，6个月保质期。请勿保存于液氮中。保存温度的微小变动都会导致感受态效价的大幅降低。

使用方法：

• 电转感受态 (30 μL/支)
  • pUC19质粒（10 pg/μL）
  • 连接产物（自制）
  • 0.1cm 电转杯（BTX，45-0124）
  • 电转仪（Biorad，165-2662）
  • 14mL圆底摇菌管（BD，352059）
  • 氨苄抗性的9cm直径LB平板
  • SOC液体培养基

1. 将摇床设定为37℃，250rpm，开启预热备用；
2. 1个含有975μL SOC、1个含有990μL SOC、2个含有900μL SOC的 14mL无菌圆底摇菌管，放入开启的摇床中预热；
3. 将电转杯插入冰中预冷；
4. 将电转仪调至1800V电压，600Ω电阻，10μF电容（如果电转在冷房里进行更好）；
5. 将电转感受态细菌插入冰中放置3~5分钟解冻后，
   1.  转化pUC19质粒检测感受态细菌转化效率：

加入1μL 10pg/μL pUC19质粒，轻柔吹打或手指轻弹管底混匀，插入冰中继续放置1分钟；

1.  转化小量连接产物

   加入1μL 连接产物，轻柔吹打或手指轻弹管底混匀，插入冰中继续放置1分钟；

1. 转化大量连接产物

先用酚氯仿纯化连接产物，用ddH₂O重悬DNA沉淀后，吸取适量（体积≤2μL，浓度≤100ng/μL）加入到电转感受态细菌中，轻柔吹打或手指轻弹管底混匀，插入冰中继续放置1分钟；

6. 取出37℃预热的装有975μL SOC培养基的摇菌管放在超净台试管架上；
7. 取出预冷的电转杯在超净台上放平并擦去表面水分，将菌液-DNA混合液沿壁转入电转杯中（最好不要产生气泡，如果产生气泡则要在超净台上轻磕一下电转杯去除气泡，否则会产生电火花），放入电转仪中电击，电击后10秒内加入975μL预热的SOC培养基（时间恒定值最好在3.5-4.5ms之间）；
8. 立刻用移液枪将1mL细菌悬液全部吸出转入14mL无菌圆底摇菌管中，37℃，250rpm培养1小时

9. 吸出10μL细菌液加入到990μL 预热的SOC培养基中混匀；取100μL稀释液加入到900μL 预热的SOC培养基中混匀；再取100μL稀释液加入到900μL 预热的SOC培养基中混匀；则菌液梯度稀释了100，1000，10000倍，再从低浓度到高浓度分别取100μL涂布在氨苄抗性的9cm直径LB平板上，37℃倒置培养过夜后，统计菌落数

电转感受态细胞的转化效率计算说明：
假如1000倍稀释且涂布了100μL稀释液的平板上长出了40个克隆，则计算方法如下：
40/(10pg/1000) x (1mL/100 μL) = 4x10⁴cfu/pg =4 x10¹⁰cfu/μg